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細胞生物學(xué)實驗報告(精選5篇)
在現(xiàn)在社會,越來越多人會去使用報告,報告具有成文事后性的特點。你還在對寫報告感到一籌莫展嗎?以下是小編為大家收集的細胞生物學(xué)實驗報告,歡迎閱讀與收藏。
細胞生物學(xué)實驗報告 1
實驗?zāi)康?/strong>
1、學(xué)習(xí)并掌握動物細胞培養(yǎng)的無菌操作技術(shù)。
2、了解原代細胞培養(yǎng)的基本方法及操作過程。
3、學(xué)習(xí)細胞計數(shù)及營養(yǎng)液的配制。
實驗原理
1、細胞原代培養(yǎng)
原代細胞培養(yǎng)是指直接從動物體內(nèi)獲取的細胞、組織和器官,經(jīng)體外培養(yǎng)后,直到第一次傳代為止。這種培養(yǎng),首先用無菌操作的方法,從動物體內(nèi)取出所需的組織(或器官),經(jīng)消化,分解成單個游離細胞,在人工培養(yǎng)下,使其不斷的生長及繁殖。
細胞培養(yǎng)是一種操作繁瑣而又要求十分嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶嶒灱夹g(shù)。要使細胞能在體外長期生長,必須滿足兩個基本要求:
一是供給細胞存活所必須的條件,如適量的水、無機鹽、氨基酸、維生素、葡萄糖及其有關(guān)的生長因子、氧氣、適宜的溫度,注意外環(huán)境酸堿度與滲透壓的調(diào)節(jié)。
二是嚴(yán)格控制無菌條件。
2、細胞死活鑒定死活細胞的鑒定方法有很多種,常用的有染色法和儀器分析法。染色法是常用的細胞死活鑒定方法,簡便,易于操作。不同的死活細胞鑒定方法有各自不同具體的反應(yīng)機理,但無論采用何種辦法,都是利用了死活細胞在生理機能和性質(zhì)上的差異。
染色法分化學(xué)染色法和熒光染色法,根據(jù)染色機理的不同,染料或使死細胞著色,或使活細胞著色。
死活細胞在生理機能和性質(zhì)上的差異主要包括:
1、死活細胞細胞膜通透性的差異:活細胞的細胞膜是一種選擇性膜,對細胞起保護和屏障作用,只允許物質(zhì)選擇性的.通過;而細胞死亡之后,細胞膜受損,通透性增加。常用的以臺盼藍鑒別細胞死活的方法就是利用了這一性質(zhì)。臺盼藍,又稱錐藍,是一種陰離子型染料,不能通過完整的細胞膜。所以經(jīng)臺盼藍染色后只能使死細胞著色,而活細胞不被著色。甲基藍有類似的染色機理。植物細胞的質(zhì)壁分離也可鑒定死活。
2、死活細胞在代謝上的差異:是采用美藍染料鑒定酵母細胞死活的依據(jù)。美藍是一種無毒染料,氧化型為藍色,還原型為無色。由于活細胞中新陳代謝的作用,使細胞內(nèi)具有較強的還原能力,能使美藍從藍色的氧化性變?yōu)闊o色的還原型,因此美藍染色后活的酵母細胞無色;而死細胞或代謝緩慢的老細胞,則因它們的無還原能力或還原能力極弱,使美藍處于氧化態(tài),從而被染成藍色或淡藍色。
除此之外,還有一些細胞器的專有染料。如液泡系的專有染料中性紅。中性紅是一種低毒性染料,可以使活細胞液泡著紅色,而細胞質(zhì)和細胞核不被著色;死細胞的液泡不被著色或淺染,染料彌散于整個細胞中,細胞核和細胞質(zhì)被染成紅色。有時侯為了增加染色效果可以將兩種染料結(jié)合使用,如甲基藍-中性紅混合染色法。
實驗用品
1、材料小白鼠
2、試劑
臺盼藍、伊紅、PBS緩沖液、細胞培養(yǎng)液(含生長因子)
3、器材
剪子、棉球、75%酒精、移液槍、無菌操作臺、正置光學(xué)顯微鏡、倒置光學(xué)顯微鏡、解剖盤、滴管、離心管、離心機、注射器、Eppendorf管、培養(yǎng)皿、酒精燈、塑料培養(yǎng)皿、載玻片、蓋玻片、血細胞計數(shù)板
實驗步驟
1、取材
取小鼠一只,采用斷頭法處死。清水洗小鼠浸入75%酒精中消毒3min,取出轉(zhuǎn)入超凈工作臺內(nèi)的解剖盤中,無菌操作打開腹腔,取出其脾臟,除去其周圍的脂肪組織,并用PBS液自上而下淋洗1-2次,轉(zhuǎn)入無菌培養(yǎng)皿中待用。
2、分離脾細胞
用滴管向培養(yǎng)皿中注入30滴PBS緩沖液,再用“L”型針頭注射器在皿中吸取0.2毫升PBS液注入脾臟,注射時沿長軸注射。然后再用針頭在脾臟上扎眼,并用“L”型針頭輕輕刮出脾細胞。在均勻吹勻脾臟細胞。
吸取上述分離的單個脾細胞懸液,放入Eppendorf管中,使量至1mL,以1000r/min離心5min。
3、培養(yǎng)脾細胞
取塑料培養(yǎng)皿一套,用移液槍吸取培養(yǎng)液2mL加入塑料皿中,并將皿標(biāo)記待用。取離心后的Eppendorf管,棄去上清液,用移液槍(200ul)吸取塑料皿中的培養(yǎng)液400ul加入棄去上清的Eppendorf管中,用槍頭吹勻管底的脾細胞,吸取200ul脾細胞懸液接種于上述塑料皿中,混勻后放入37°C,5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4、配制染液
用生理鹽水配成5%臺盼藍染液,備用。
5、染色
取0.5mL細胞懸濁液放入試管中,加入1-2滴染液。混合。2-5min后將細胞放在血細胞計數(shù)板上觀察死活情況,注意不要有氣泡產(chǎn)生,放大倍數(shù)為10x10。染色后活細胞不著色,死細胞顯示藍色。注意染色時間不能超過15min,否則染液將細胞毒殺。
6、計數(shù)
在10x10倍的顯微鏡下觀察,計算血細胞計數(shù)板的4個4小方格的細胞數(shù)量。包括細胞總數(shù)與死細胞數(shù)量。壓線者計上不計下,計左不計右。
7、計算細胞活力
根據(jù)公式:細胞活力=(總細胞數(shù)-死細胞數(shù))/總細胞數(shù)×100%
實驗結(jié)果
臺盼藍染色后的細胞(10x10)伊紅染色后的細胞(10x10)
總細胞數(shù)和活細胞數(shù)統(tǒng)計表(10×10)
項目自己培養(yǎng)細胞老師培養(yǎng)細胞總細胞數(shù)個/ml活細胞數(shù)個/ml細胞活力1.4×1067.5×1053.0×1055.5×10521.4%73.3%
分析與討論
1、結(jié)果分析
本次實驗中我們小組自己培養(yǎng)細胞所測細胞活力為21.4%,并不算高,分析得應(yīng)有以下原因可能影響實驗結(jié)果(包括誤差):
、湃粼跓o菌操作的過程中操作不規(guī)范,導(dǎo)致染菌,會極大的影響觀察,導(dǎo)致實驗失敗。
、迫粼陔x心分離呈單細胞的過程中離心機轉(zhuǎn)速過快或時間過長很可能會導(dǎo)致細胞破裂,導(dǎo)致小鼠脾細胞大量死亡。
、侨旧珪r間過長,或觀察時間過長都會導(dǎo)致染色試劑將細胞殺死,使細胞活力驟降,這是導(dǎo)致細胞活力比較低的重要原因。
⑷實驗中的一些操作不正確或不規(guī)范的情況、計算帶來的誤差等也會直接導(dǎo)致實驗誤差。
2、注意事項
、艊(yán)格進行動物消毒,需用75%酒精消毒。
⑵嚴(yán)格進行無菌操作,防止細菌、霉菌、支原體污染,避免化學(xué)物質(zhì)污染。
、俏∫后w前,瓶口和吸管硬行火焰消毒;吸取液體時,避免碰撞。
、入x心管入臺前,管口、管壁應(yīng)消毒。
、蓪嶒炚唠x開超凈臺時,要隨時用肘部關(guān)閉工作窗。
、势鞑氖褂脮r既要注意用火焰消毒,又要防止?fàn)C傷、燙死細胞。
細胞生物學(xué)實驗報告 2
一、實驗?zāi)康模?/strong>
1、掌握顯示細胞中過氧化物酶反應(yīng)的原理和方法。
2、了解細胞凋亡的生物學(xué)意義
3、掌握凋亡細胞的形態(tài)學(xué)檢測方法
二、實驗原理:
1、細胞內(nèi)的過氧化物酶能把許多胺類氧化為有色化合物,用聯(lián)苯胺處理標(biāo)本,細胞內(nèi)的過氧化物酶能把聯(lián)苯胺氧化為藍色的聯(lián)苯胺藍,進而變?yōu)樽厣a(chǎn)物,因而可以根據(jù)顏色反應(yīng)來判定過氧化物酶的有無或多少。中間產(chǎn)物藍色聯(lián)苯胺是不穩(wěn)定的,無需酶的參加即可氧化為棕色化合物。
2、細胞凋亡是指細胞在生理或病理條件下,遵循自身的程序,自己結(jié)束其生命的過程。它是一個主動的、高度有序的,基因控制的,一系列酶參與的過程。
3、凋亡細胞形態(tài)學(xué)特征是:體積變小,細胞質(zhì)濃縮;細胞核發(fā)生染色質(zhì)凝聚和聚集于核膜周圍(邊緣化);細胞膜有小泡狀形成;晚期細胞膜內(nèi)陷形成大小不同的凋亡小體;根據(jù)細胞凋亡形態(tài)學(xué)特征進行顯微觀察是檢測細胞凋亡的一種直觀、可靠的方法。
三、實驗步驟:
細胞中過氧化物酶的顯示
1、在載片上滴一滴PBS緩沖液;
2、取骨髓細胞:用斷頸法處死小鼠,立即剪取后肢,去除肌肉,剝出后肢股骨,剪開股骨一端,用牙簽尖的'一端插入剪開的小孔中,摳取少許骨髓細胞置滴有PBS的載片上;
3、涂片:用另一玻片將骨髓細胞沿一個方向涂布推開,室溫晾干;
4、媒染:在涂片上滴0.5%硫酸銅液,以蓋滿涂片為宜,處理30秒-1分鐘。
5、傾去硫酸銅液,直接滴入聯(lián)苯胺混合液反應(yīng)6分鐘(以蓋滿涂片為宜)
6、清水沖洗,番紅復(fù)染2min。
7、鏡檢:清水沖洗,室溫晾干,先低倍鏡下觀察,后換高倍鏡下觀察(油鏡100×)
細胞凋亡的形態(tài)學(xué)檢測與觀察吉姆薩染色:
1、取細胞爬片置于小培養(yǎng)皿中(有細胞面朝上)
2、生理鹽水輕輕漂洗細胞
3、95%乙醇固定5min
4、PBS緩沖液洗2次
5、吉姆薩染色液染色5min
6、蒸餾水輕輕洗去染液
7、普通光學(xué)顯微鏡下觀察。
吖啶橙染色:
1、取細胞爬片置于小培養(yǎng)皿中(有細胞面朝上)
2、生理鹽水輕輕漂洗細胞
3、甲醇:冰醋酸(3:1)固定5min
4、PBS緩沖液洗2次每次1min
5、0.01%吖啶橙染色液在避光環(huán)境下染色5min6、蒸餾水輕輕洗去染液
6、選用藍光激發(fā)濾片在熒光顯微鏡下觀察。
四、結(jié)果與分析:
根據(jù)隨機選擇的幾個視野的統(tǒng)計,該樣品的細胞凋亡率=227/506×100=44.9
Hela細胞凋亡過程中核染色質(zhì)的形態(tài)變化(吖啶橙染色)
五、思考題:
1、細胞凋亡的調(diào)控機制
細胞凋亡是一個受基因調(diào)控、眾多細胞膜受體和胞漿蛋白參與的細胞主動自殺過程,其觸發(fā)因素多種多樣,包括細胞內(nèi)誘導(dǎo)因子和抑制因子對細胞凋亡的調(diào)控。
2、細胞凋亡的特征
凋亡細胞形態(tài)學(xué)特征是:體積變小,細胞質(zhì)濃縮;細胞核發(fā)生染色質(zhì)凝聚和聚集于核膜周圍(邊緣化);細胞膜有小泡狀形成;晚期細胞膜內(nèi)陷形成大小不同的凋亡小體。
3、研究細胞凋亡的方法
定性的研究方法:常規(guī)瓊脂糖凝膠電泳、脈沖場倒轉(zhuǎn)瓊脂糖凝膠電泳、形態(tài)學(xué)觀察(普通光學(xué)顯微鏡、透射電鏡、熒光顯微鏡)
定量或半定量的研究方法:各種流式細胞儀方法、原位末端標(biāo)記法、ELISA定量瓊脂糖凝膠電泳。
細胞生物學(xué)實驗報告 3
一、實驗?zāi)康?/strong>
1、觀察植物細胞有絲分裂的過程,識別有絲分裂的不同時期。
2、初步掌握制作洋蔥根尖有絲分裂裝片的技能。
3、初步掌握繪制生物圖的方法。
二、實驗原理
在植物體中,有絲分裂常見于根尖、莖尖等分生區(qū)細胞,高等植物細胞有絲分裂的過程,分為分裂間期和分裂期的前期、中期、后期、末期?梢杂酶弑讹@微鏡觀察植物細胞的有絲分裂的過程,根據(jù)各個時期細胞內(nèi)染色體(或染色質(zhì))的變化情況,識別該細胞處于有絲分裂的.哪個時期,細胞核內(nèi)的染色體容易被堿性染料著色。
三、材料用具
洋蔥根尖、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、滴管、鑷子、培養(yǎng)皿、鉛筆、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%的鹽酸、體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01g/ml的龍膽紫(或紫藥水)
四、實驗過程
1、洋蔥根尖的培養(yǎng)(提前3—4天)
2、解離:5min
3、漂洗:10min
4、染色:5min
5、制片
6、鏡檢
五、注意
1、解離充分是實驗成功的必備條件。解離充分,組織才能分散,細胞也不會重疊。
2、漂洗時間一定要足夠,否則細胞染不上色。
3、染色時,染液的濃度和染色時間必須掌握好。特別是染色不能過深,否則鏡下一片紫色,無法觀察。
六、討論
1、制作好洋蔥根尖有絲分裂裝片的關(guān)鍵是什么?談?wù)勀阕约旱捏w會。
2、在觀察清楚有絲分裂各個時期的細胞以后,繪出洋蔥根尖細胞有絲分裂的簡圖,并標(biāo)明時期。
細胞生物學(xué)實驗報告 4
一、實驗?zāi)康?/strong>
1、初步掌握高倍顯微鏡的使用方法。
2、觀察高等植物的葉綠體在細胞質(zhì)基質(zhì)中的形態(tài)和分布
二、實驗原理
高等植物的葉綠體呈橢球狀,在不同的光照條件下,葉綠體可以運動,改變橢球體的方向,這樣既能接受較多的光照,又不至于被強光灼傷。在強光下,葉綠體以其橢球體的側(cè)面朝向光源;在弱光下,葉綠體以其橢球體的正面朝向光源。因此,在不同光照條件下采集的葫蘆蘚,其小葉內(nèi)葉綠體橢球體的形狀不完全一樣。
活細胞中的細胞質(zhì)處于不斷的流動狀態(tài),觀察細胞質(zhì)的.流動,可以用細胞質(zhì)基質(zhì)中的葉綠體的運動做為標(biāo)志。
三、材料用具
蘚類的葉,新鮮的黑藻,顯微鏡,載玻片,蓋玻片,滴管,鑷子,刀片,培養(yǎng)皿,鉛筆
四、實驗過程
1.制作蘚類葉片的臨時裝片
2.用顯微鏡觀察葉綠體
3.制作黑藻葉片臨時裝片
4.用顯微鏡觀察細胞質(zhì)流動
五、討論
1.細胞質(zhì)基質(zhì)中的葉綠體是否靜止不動,為什么?
2.葉綠體的形態(tài)和分布與葉綠體的功能有什么關(guān)系?
3.植物細胞的細胞質(zhì)處于不斷的流動狀態(tài),這對于活細胞完成生命活動有什么意義?
4.用鉛筆畫一個葉片細胞,標(biāo)出葉綠體的大致流動方向。
細胞生物學(xué)實驗報告 5
一、實驗?zāi)康?/strong>
1. 初步學(xué)會觀察植物細胞質(zhì)壁分離和復(fù)原的方法。
2. 理解植物細胞發(fā)生滲透作用的原理。
二、實驗原理
當(dāng)細胞液的濃度小于外界溶液的濃度時,細胞液中的水分就通過原生質(zhì)層進入外界溶液中,使細胞壁和原生質(zhì)層都出現(xiàn)一定的收縮。由于原生質(zhì)層比細胞壁的收縮性大,當(dāng)細胞不斷失水時,原生質(zhì)層就會與細胞壁逐漸分離開,也就是分升了質(zhì)壁分離當(dāng)細胞液的'濃度大于外界溶液的濃度時,外界溶液中的水分就通過原生質(zhì)層進入細胞液中,整個原生質(zhì)層就會慢慢地恢復(fù)成原來的狀態(tài),使植物細胞逐漸發(fā)生質(zhì)壁分離復(fù)原。
三、材料用具
紫色洋蔥鱗片葉、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、滴管、鑷子、刀片、吸水紙、清水、0.3g/ml蔗糖溶液
四、實驗過程
物理實驗報告 ——化學(xué)實驗報告 ——生物實驗報告 ——實驗報告格式 ——實驗報告模板
五、討論
1.如果將洋蔥表皮細胞浸潤在與細胞液濃度相同的蔗糖溶液中,這些表皮細胞會出現(xiàn)什么現(xiàn)象?
2.當(dāng)紅細胞細胞膜兩側(cè)的溶液具有濃度差時,紅細胞會不會發(fā)生質(zhì)壁分離現(xiàn)象?為什么?
3.畫一個細胞在正常狀態(tài)下到經(jīng)過0.3g/ml蔗糖溶液處理,再經(jīng)過清水處理的細胞變化的一系列模式圖。
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