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實(shí)驗(yàn) 生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的鑒定
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
初步掌握鑒定生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的基本方法。
二、實(shí)驗(yàn)原理
1．還原糖的鑒定原理 生物組織中普遍存在的還原糖種類較多，常見的有葡萄糖、果糖、麥芽糖。它們的分子內(nèi)都含有還原性基團(tuán)（游離醛基或游離酮基），因此叫做還原糖。蔗糖的分子內(nèi)沒有游離的半縮醛羥基，因此叫做非還原性糖，不具有還原性。本實(shí)驗(yàn)中，用斐林試劑只能檢驗(yàn)生物組織中還原糖存在與否，而不能鑒定非還原性糖。
斐林試劑由質(zhì)量濃度為0.1 g／mL的氫氧化鈉溶液和質(zhì)量濃度為0.05g／mL的硫酸銅溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡藍(lán)色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2與加入的葡萄糖在加熱的條件下，能夠生成磚紅色的Cu2O沉淀，而葡萄糖本身則氧化成葡萄糖酸。其反應(yīng)式如下：
CH2OH—(CHOH)4—CHO＋2Cu(OH)2→CH2OH—(CHOH)4—COOH＋Cu2O↓＋2H2O
用斐林試劑鑒定還原糖時(shí)，溶液的顏色變化過程為：淺藍(lán)色 棕色 磚紅色(沉淀)。
2．蛋白質(zhì)的鑒定原理 鑒定生物組織中是否含有蛋白質(zhì)時(shí)，常用雙縮脲法，使用的是雙縮脲試劑。雙縮脲試劑的成分是質(zhì)量濃度為0.1 g／mL的氫氧化鈉溶液(A)和質(zhì)量濃度為0.01 g／mL(B)的硫酸銅溶液。在堿性溶液(NaOH)中，雙縮脲(H2NOC—NH—CONH2)能與Cu2+作用，形成紫色或紫紅色的絡(luò)合物，這個(gè)反應(yīng)叫做雙縮脲反應(yīng)。由于蛋白質(zhì)分子中含有很多與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似的肽鍵，因此，蛋白質(zhì)可與雙縮脲試劑發(fā)生顏色反應(yīng)。
3．脂肪的鑒定原理 脂肪可以被蘇丹Ⅲ染成橘黃色，被蘇丹Ⅳ 染成紅色
三、實(shí)驗(yàn)過程
四、實(shí)驗(yàn)用品
五、注意
1.關(guān)于鑒定還原糖的實(shí)驗(yàn)，在加熱試管中的溶液時(shí)，應(yīng)該用試管夾夾住試管上部，并放入盛開水的大燒杯中加熱。注意試管底部不要接觸燒杯底部，同時(shí)試管口不要朝向?qū)嶒?yàn)者，以免試管內(nèi)溶液沸騰時(shí)沖出試管，造成燙傷。如果試管內(nèi)溶液過于沸騰，可以上提試管夾，使試管底部離開大燒杯中的開水。
2.斐林試劑的甲液和乙液混合均勻后方可使用，切勿將甲液和乙液分別加入組織樣液中。
3．蛋白質(zhì)的鑒定中先加雙縮脲A，再加雙縮脲B
六、討論
鑒定生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的根據(jù)是什么？
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