植物中皂苷類成分的檢測技術(shù)進展論文
論文摘要：皂苷類成分在植物中分布廣泛、資源豐富，許多皂苷具有良好的抗腫瘤活性，并且在治療糖尿病方面具有驚人的功效。因此皂苷作為治療癌癥、糖尿病等疾病的藥物成分具有很大的研究價值。本文綜述了近年來國內(nèi)外植物中皂苷類成分的檢測技術(shù)，以期為進一步提高皂苷類藥物的質(zhì)量控制標準，更好的開發(fā)皂苷類藥物提供理論和技術(shù)參考。
論文關(guān)鍵詞：皂苷,檢測技術(shù),質(zhì)量控制
1前言
皂苷是固醇或三萜類化合物的低聚配糖體總稱，在薔薇科、石竹科、無患子科、百合科、玄參科、豆科等科的某些屬植物中分布較多。根據(jù)皂苷元的結(jié)構(gòu)可將皂苷分為三萜皂苷和甾體皂苷兩大類。大量研究表明，皂苷在祛痰、止咳、鎮(zhèn)靜、解熱、抗菌、抗癌、調(diào)節(jié)機體代謝及免疫、治療心血管疾病和糖尿病等方面具有良好的功效。目前已經(jīng)有人參皂苷、三七皂苷、絞股藍皂苷等中成藥和復(fù)方制劑生產(chǎn)上市，并且這類藥物在服用后有很好的效果。所以預(yù)計今后會有越來越多的皂苷類藥物被給予研究、生產(chǎn)。本文將近年來國內(nèi)外對植物中皂苷類成分分析方法進行綜述，以期為提高皂苷生藥和制劑的質(zhì)控標準，更好地開發(fā)和利用皂苷類生藥資源提供理論與技術(shù)參考。
2分析方法
2.1比色法
比色法是皂苷類成分分析測定中歷史較長、應(yīng)用較普遍的方法。其原理是皂苷類成分和一些顯色試劑反應(yīng)后顯色，可以在一定波長處進行測量。常用的顯色劑有：香草醛－高氯酸－冰醋酸、香草醛－高氯酸－80％磷酸、香草醛－70％硫酸水溶液等。這些顏色反應(yīng)雖然靈敏，但是專屬性較差，所以比色法常用于總皂苷的測定。楊紅等用薄層層析－比色法測定降糖安膠囊中胡蘆巴皂苷B含量，采用硅膠H薄層板，氯仿:甲醇:醋酸:水（25:12:2:2）為展開劑，在碘蒸氣中定位，用高氯酸顯色，325nm波長處檢測。由于比色法所顯顏色隨顯色溫度和時間的變化而變化，因此比色法重現(xiàn)性差。采用此法時須嚴格控制使測定條件相同，盡量避免干擾。
2.2分光光度法
分光光度法其實是比色法的延伸。它不僅能測定有色物質(zhì)，還能精確測定含共軛結(jié)構(gòu)和雜原子的有紫外吸收的無色物質(zhì)。常用的有紫外分光光度法、熒光分光光度法、原子吸收光譜法等。如孔燕君等利用皂苷分子上的糖基能被濃硫酸氧化脫水成糖醛衍生物的性質(zhì)，建立了測定人參皂苷的分光光度法，測定波長為322nm。并用此方法測定了生藥生曬參、紅參、西洋參、三七及中中成藥雙寶素膠囊中人參皂苷的含量。在上述常規(guī)的分光光度法之外，有人采用了分光光度法與其它方法聯(lián)用的方法。如何克江等采用純化和分光光度法檢測聯(lián)用的方法，建立定量測定人參總皂苷的簡易方法。
2.3色譜法
2.3.1薄層色譜法
TLC可以使某一成分與其它成分或雜質(zhì)分離，排除干擾，從而進行定性或定量分析。由于其簡便易行，并可以同時作多個樣品點的平行分析，因此得到廣泛的應(yīng)用。近年來，單純的TLC法僅用來定性分析，通過同板或異板Rf值來鑒定成分，古老的目視比較法等薄層定量方法已被薄層－紫外分光光度法、薄層掃描法取代。薄層掃描法是定量分析中應(yīng)用普遍、快速、準確的方法。其線性范圍、精密度、重復(fù)性和加樣回收等各項方法學(xué)研究方面均獲良好的結(jié)果。
2.3.2薄層掃描法
薄層掃描法分離效能高，所用儀器設(shè)備簡單，操作簡便并可同時作多樣品的平行分析。與比色法和分光光度法相比，其方法專屬性和穩(wěn)定性都有提高，既可定性也可定量。因此薄層掃描法在藥物的鑒別和中成藥尤其是復(fù)方制劑中有效成分的分離分析方面應(yīng)用廣泛。張中蘇等采用薄層掃描法測定龜齡集中人參的人參皂苷Rg1的含量。使用硅膠G薄層板，以氯仿－甲醇－水（65:35:10）10℃以下放置的下層溶液為展開劑；10％硫酸乙醇溶液為顯色劑；雙波長反射法鋸齒掃描：λ＝541nm，λ＝700nm；狹縫0.4mm×0.4mm；靈敏度：中；線性化參數(shù)：SX＝3。通過方法學(xué)考擦，點樣量在1.03-6.18μg范圍內(nèi)良好的線性關(guān)系。
2.3.3高效液相色譜法
高效液相色譜法具有分離效能比薄層層析高，分析速度快，自動化程度高，靈敏度高等特點。目前用HPLC法檢測皂苷類成分的檢測器主要有紫外檢測器（UV）、蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD）、熒光檢測器（FD）和示差拆光檢測器等。
2.3.3.1高效液相－紫外分光光度法
龐煥等利用HPLC-UV法研究了20（R）-人參皂苷Rg3人體藥代動力學(xué)。研究中主要問題是由于皂苷類化合物的結(jié)構(gòu)中所含雙鍵很少或沒有，因此使用紫外檢測器時只能用末端吸收進行檢測，溶液受到流動相等各種試劑的干擾，使基線不穩(wěn)，影響質(zhì)量�？梢酝ㄟ^仔細地選擇色譜條件獲得較好的結(jié)果。
2.3.3.2高效液相－蒸發(fā)光檢測法
對于一些沒有紫外吸收的樣品，通常用蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD）與HPLC聯(lián)用檢測含量。ELSD靈敏度高，對流動相系統(tǒng)穩(wěn)定變化不敏感，可以梯度洗脫，與UV檢測器相比擴大了HPLC的應(yīng)用范圍，消除雜質(zhì)和流動相的紫外吸收干擾，無需測定校正因子就可定量。近年來，對中藥桔梗、麥冬、人參、酸棗仁等以及其制劑中的皂苷成分檢測多采用該法。如李會軍等采用HPLC-ELSD法對酸棗仁中的酸棗仁皂苷A及B進行了含量測定研究，結(jié)果重現(xiàn)性好，可用于酸棗仁藥材的質(zhì)量控制。
2.3.4.3高效液相－質(zhì)譜聯(lián)用法
HPLC-MS法是近十年來發(fā)展成熟的分析技術(shù)，它集HPLC的高分離效能與串聯(lián)質(zhì)譜的高靈敏度、高專屬性的優(yōu)點于一體，并能夠給出被檢測組分的分子量信息。通過多級串聯(lián)質(zhì)譜分析還可得到被測物質(zhì)的結(jié)構(gòu)信息。HyeYoungJi等建立了同時測定血漿中的人參皂苷Rb1和Rg1的LC/MS法,最低定量限能達到10ng/mL，克服了其它分析方法需加大口服劑量來遷就靈敏度的問題。
2.3.4.4反相HPLC法
彭中芳等用反相HPLC法測定西洋參蟲草中服液中人參皂苷Rb1的含量，色柱為HpersilBDS柱（200mm×4.6mm,5μm），流動相為乙腈－水（30:70），檢測波長203nm，流速1ml/min，該方法回收率為99.1％。周慶武等用反相HPLC法測定酸棗仁中酸棗仁皂苷A的含量，采用HypersilC柱為分析柱，乙腈:水（30:70,V/V）為流動相，檢測波長為204nm，流速為0.8ml/min。該法簡便、快速、重線性好，適合于酸棗仁中酸棗仁皂苷A的定量分析。
2.3.5氣相色譜法
氣相色譜法是以氣體為流動相的一種色譜法，用這種方法檢測時必須使待測樣品氣化揮發(fā)，但是皂苷是一種高沸點且極性大的分子，即使是脫掉糖鏈的皂苷元也具有較大的極性和分子量，給GC分析帶來了困難。近年來在一些研究中對樣品進行甲基、乙�；苌幚砜墒乖碥粘煞忠子诒粰z測。同時一些研究也試圖通過氣相色譜法來測定分析未經(jīng)衍生化處理的皂苷成分的辦法。目前由于使用了高效能的色譜柱，高靈敏度的檢測器和微機處理，使氣相色譜成為一種分析速度快、靈敏度高、應(yīng)用范圍廣的分析方法。都述虎等建立毛細管氣相色譜法測定穿龍薯蕷總皂苷中薯蕷皂苷元的含量。選用HP-1耐高溫非極性毛細管柱，柱溫270℃，載氣（N）流速：2.0mlL/min。樣品無需衍生化處理，方法簡單，分離效果好。
2.3.6毛細管電泳法
毛細管電泳是以高壓電場為驅(qū)動力，以毛細管為分離通道，依據(jù)試樣中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實現(xiàn)分離、分析物質(zhì)的一類液相技術(shù)，是經(jīng)典電泳技術(shù)和現(xiàn)代微柱分離的結(jié)合。楊偉峰等人用膠束電動毛細管電泳（MECC）法測定西洋參中人參皂苷Re，Rb的含量取得了滿意的色譜分離效果。該方法具有樣品前處理簡單，可以同時測定兩種成分，重現(xiàn)性好，使用溶劑量少，所得色譜圖信息豐富等特點�？梢杂糜谖餮髤⑺幉募捌渲苿┑馁|(zhì)量控制或品質(zhì)評價。
2.4其他方法
2.4.1近紅外光譜法
楊南林等在測定中藥材三七皂苷類成分研究中提出一種快速無損的測定新方法——近紅外光譜法。其原理是用近紅外漫反射光譜掃描一定量的已知皂苷含量的`樣本，將掃描的均值與皂苷含量和一些因素建立一定的數(shù)學(xué)模型，用這個數(shù)學(xué)模型去識別未知樣本中皂苷的含量。楊南林在0.133％~7.040％濃度內(nèi)，根據(jù)三七總皂苷在7500－4000cm的近紅外吸收光譜，利用光纖遠程傳輸技術(shù)，采用偏最小二乘法建立校正模型，建立了在三七藥材提取物中定量檢測該物質(zhì)的新方法，交叉驗證均方差為0.159％。該方法可直接對固體樣本進行掃描分析，快速、無損、不使用有機溶劑、大大減輕了分析時間和勞動強度，適合于中藥工業(yè)過程在線檢測。
2.4.2酶免疫分析法
NahJJ等用酶免疫分析（EIA）法定量測定了粗制總皂苷中和小鼠血漿中的人參皂苷Rf。該法快速靈敏，在粗提物中檢測能達到20pg，血漿中能達到34pg。Yoon等用EIA法定性分析微量人參皂苷Rf后，又定量檢測了人參皂苷Rf和Rg，并將EIA法與HPLC法進行了比較，效果良好。
3總結(jié)
綜上所述，以上幾種分析方法都在皂苷類成分的定量定性分析中取得了成功。目前由于研究皂苷類成分種類數(shù)目相對太少，且主要集中在大豆皂苷、甘草皂苷、人參皂苷如Rg、Rb、Rf等方面，對麥冬、桔梗、三七、酸棗仁、淫羊霍等中藥中皂苷類成分的測定方法研究還有待加強，因此非常有必要進一步豐富測定方法，提高皂苷類化合物的測定水平，這對于提高中成藥質(zhì)量，指導(dǎo)合理的藥劑類型設(shè)計，制定科學(xué)的藥品質(zhì)量標準，繼承和挖掘祖國的傳統(tǒng)醫(yī)藥寶藏，提高中藥理論具有非常重要的意義。
參考文獻
1 楊紅,黃衛(wèi)平,王筎,等.薄層層析-比色法測定降糖安膠囊中胡蘆巴皂苷B的含量[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2003,15(6):513.
2 孔燕君,洪美鳳.紫外分光光度法測定人參及三七中總皂苷含量[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志,2000,17(1):51.
3 何克江,韓蔚,欒宏偉,等.純化和分光光度法檢測聯(lián)用的人參總皂苷簡易測定方法[J].藥物分析雜志,2003,23(4):284.
4 張中蘇,楊艷,羅晉萍,等.薄層掃描法測定龜齡集中人參皂苷Rg1的含量[J].藥物分析雜志,1999,19(1):13.
5 龐煥,蘇成業(yè),汪海林,等.20(R)-人參皂苷Rg3人體藥代動力學(xué)研究[J].藥學(xué)學(xué)報,2001,36(3):170~173.
6 李會軍,李萍.高效液相色譜法蒸發(fā)光散射檢測器測定酸棗仁中酸棗仁皂苷A及B的含量[J].藥物分析雜志,2000,20(2):82.
7 Hye Young Ji,Hye Won Lee,Hae Kyoung Kim,et al.Simultaneous determination of ginsenoside Rb1 and Rg1 in human plasma by liquid chromatography-mass spectrometry[J].Journal of Pharmaceutical and BiomedicalAnalysis,2004,35(1):207.
8 彭中芳,劉聲波.RP-HPLC法測定西洋參蟲草口服液中人參皂苷Rb1的含量[J].中藥材,2001,24(4):290.
10 周慶武,李玲玲,紀標,等.反相高效液相色譜法測定酸棗仁顆粒中酸棗仁皂苷A與酸棗仁皂苷B的含量[J].時珍國醫(yī)國藥,2009,19(3):309.
11 都述虎,王曉華,夏重道,等.穿龍薯蕷總皂苷中薯蕷皂苷元含量的毛細管氣相色譜法研究[J].藥物分析雜志,2001,21(2):116.
12 楊偉峰,趙維良.膠束電動毛細管色譜法測定西洋參中人參皂苷Rb1,Re的含量[J].中國中藥雜志,2003,28(12):1135.
13 楊南林,瞿海斌,程翼羽,等.近紅外光譜法快速測定三七總皂苷的方法研究[J].浙江大學(xué)學(xué)報,2002,36(4):463~466.
14 Nah JJ. Preparation of monoclonal antibody against ginsenoside Rf and its enzyme immunoassay[J].Biol Pharm Bull, 2000,23(5):523.
15 Yoon S R, Nah JJ, Kim S K, et al. Detemination of ginsenoside Rf and Rg2 from Panax ginseng using enzyme immunoassay[J].ChenPharm Bull,1998,46(7):1144.
【植物中皂苷類成分的檢測技術(shù)進展論文】相關(guān)文章：
白頭翁皂苷成分及藥理作用研究進度論文04-07
植物組織培養(yǎng)技術(shù)的研究進展論文06-29
淺析中藥有效成分現(xiàn)代提取技術(shù)研究進展的論文05-28
水煤漿技術(shù)進展探析論文05-05
連翹酯苷論文分析05-26