淺論婦科養(yǎng)坤丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)探究論文
【摘要】目的建立婦科養(yǎng)坤丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，以更好控制產(chǎn)品質(zhì)量。方法采用薄層色譜（TLC）法鑒別黃芩、木香、延胡索、甘草，以HPLC法測(cè)定黃芩苷的含量。結(jié)果TLC法可檢出黃芩、木香、延胡索、甘草，斑點(diǎn)清晰，陰性對(duì)照無干擾，專屬性強(qiáng)。黃芩苷在0.0576～1.44μg范圍內(nèi)線性良好(r=0.9999)，平均加樣回收率為97.85%，RSD為0.86%。結(jié)論實(shí)驗(yàn)方法定性、定量方法簡便、可靠、準(zhǔn)確，可用于婦科養(yǎng)坤丸的質(zhì)量控制。
【關(guān)鍵詞】婦科養(yǎng)坤丸黃芩苷薄層色譜高效液相色譜
1器材
1.1儀器
DionexSummit高效液相色譜儀(P680HPLCPump,ASI-100AutomatedSampledInjector,PDA-100PhtodiodeArrayDetecter，STH585ColumnOven)Chromeleon數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)；賽多利斯萬分之一電子天平（德國）；電子數(shù)控式恒溫水浴鍋（江蘇昆山醫(yī)用設(shè)備廠）；硅膠G，硅膠GF254（青島海洋化工廠生產(chǎn)）。
1.2樣品與試藥
婦科養(yǎng)坤丸：自制(批號(hào)050825，050903，050920)；去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品（供薄層鑒別用，批號(hào)111525-200404）；延胡索乙素對(duì)照品（供薄層鑒別用，批號(hào)110726-200409）；甘草次酸對(duì)照品（供薄層鑒別用，批號(hào)110723-200411），黃芩苷對(duì)照品（供含量測(cè)定用，批號(hào)110715-200514）均由中國藥品生物制品檢定所提供；甲醇為色譜純；水為超純水，其他化學(xué)試劑均為分析純。
2方法與結(jié)果
2.1薄層鑒別
2.1.1黃芩的薄層鑒別取本品11g，研細(xì)，加醋酸乙酯-甲醇（3∶1）30ml，回流30min，濾過，蒸干，加5ml甲醇，取上清液作為供試品溶液。取去黃芩的模擬處方，按供試品溶液的制備方法，依法制備陰性對(duì)照品溶液。取黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述兩種溶液各6μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水-甲醇（5∶3∶0.6∶1.5∶0.8）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鐵試液，日光下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無干擾。結(jié)果見圖1。
2.1.2木香的薄層鑒別取本品6g，研細(xì)，加氯仿10ml，超聲處理30min，濾過，濾液作為供試品溶液。取去木香的模擬處方，按供試品溶液的制備方法，依法制備陰性對(duì)照品溶液。取去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品，分別加氯仿制成每毫升含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一羧甲基纖維鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚-乙醚（5∶3.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％香醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無干擾。結(jié)果見圖2。
2.1.3延胡索的薄層鑒別取本品11g，研細(xì)，加甲醇50ml，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml溶解，加濃氨試液調(diào)至堿性（pH9～10），用乙醚提取3次，10ml/次，合并乙醚液，用稀硫酸溶液提取3次，10ml/次，合并稀硫酸液，加氫氧化鈉試液調(diào)至堿性（pH11～12），再用乙醚提取3次，10ml/次，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。取去延胡索的模擬處方，按供試品溶液的制備方法，依法制備陰性對(duì)照品溶液。取延胡索乙素對(duì)照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取供試品溶液與陰性對(duì)照溶液各10μl，對(duì)照品溶液2μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇-正丁醇-濃氨水（6∶3∶1.5∶1.5∶0.8）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的暗黃色熒光斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無干擾。結(jié)果見圖3。
2.1.4甘草的薄層鑒別取本品水蜜丸11g，研細(xì)，或大蜜丸18g，剪碎，加硅藻土12g，研勻，加乙醚60ml，加熱回流1h，濾過，藥渣加甲醇40ml，加熱回流1h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用正丁醇提取3次，20ml/次，合并正丁醇液，用水洗滌3次，蒸干，殘?jiān)尤臌}酸5ml，再加氯仿50ml超聲提取30min，濾過，取氯仿提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml溶解，作為供試品溶液。取甘草次酸對(duì)照品，加甲醇制成每毫升含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取缺甘草的其它藥材制成的蜜丸18g，同法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法［1］試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各1～2μl，分別點(diǎn)于同一羧甲基纖維鈉為黏合劑的硅膠GF254薄層板上，以石油醚-醋酸乙酯-冰醋酸（25∶9∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無干擾。結(jié)果見圖4。
2.2黃芩苷的含量測(cè)定
2.2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，色譜柱為AgillentC18(250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相為甲醇－0.1%磷酸溶液(47：53)；檢測(cè)波長為280nm；流速1.0ml·min-1；柱溫25℃。理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。
2.2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取在60℃減壓干燥4h的`黃芩苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升含60μg的溶液，即得。
2.2.3供試品溶液的制備取本品10g，研碎，取約0.5g，精密稱定，置100ml錐形瓶中，加70％乙醇50ml，精密稱定，超聲提�。�150W，35kHz）30min，放冷，精密稱定，以70％乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
2.2.4專屬性實(shí)驗(yàn)按處方比例和工藝，同法制成全方缺黃芩的的陰性對(duì)照液，按樣品供試液的制備方法制備，測(cè)定。表明:在與黃芩苷對(duì)照品色譜的相應(yīng)位置上無干擾峰出現(xiàn)，說明方中其它成分對(duì)測(cè)定結(jié)果無影響。黃芩苷對(duì)照品、供試品和陰性對(duì)照品的HPLC圖譜見圖5。
2.2.5線性關(guān)系考察取黃芩苷對(duì)照品溶液（0.060mg/ml）自動(dòng)進(jìn)樣1，5，10，15，20，25μl，按上述色譜條件設(shè)定峰面積，以峰面積（Y,mAu*sec）對(duì)進(jìn)樣量（X，μg）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=2220.2X-0.6294，r=0.9999；表明黃芩苷在0.0576～1.44μg內(nèi)線性關(guān)系良好。
2.2.6精密度實(shí)驗(yàn)取黃芩苷對(duì)照品溶液（0.060mg/ml），重復(fù)進(jìn)樣6次，10μl/次，按上述條件測(cè)得峰面積，RSD＝0.36%，表明精密度符合要求。
2.2.7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取對(duì)照品溶液和供試品溶液分別于0，2，4，8及12h，各自動(dòng)進(jìn)樣6μl，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，對(duì)照品溶液和供試品溶液的RSD分別為0.87%，1.14%。表明12h內(nèi)對(duì)照品和供試品均穩(wěn)定。
2.2.8重復(fù)性實(shí)驗(yàn)按上述的含量測(cè)定方法，對(duì)同一批樣品（批號(hào)：050825）制備供試液，平行做5份，測(cè)得峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果RSD＝1.18%，表明重復(fù)性良好。
2.2.9加樣回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取已知含量的同一批樣品(批號(hào)050825)6份，精密加入對(duì)照品適量，揮干溶劑，按供試品溶液制備項(xiàng)下操作。按色譜條件測(cè)定峰面積，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。表1加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）
2.2.10樣品的測(cè)定取3批樣品按含量測(cè)定項(xiàng)下的方法提取、測(cè)定并計(jì)算含量，每份樣品測(cè)定3次取均值。結(jié)果見表2。表2樣品測(cè)定結(jié)果（略）
3討論［2,3］
黃芩苷為多酚羥基黃酮苷類化合物，采用70％回流提取轉(zhuǎn)移率較高，但雜質(zhì)較多，經(jīng)比較，結(jié)果表明采用醋酸乙酯－甲醇（3∶1）回流提取，可顯著減少水溶性雜質(zhì)的溶出；提取樣品含有較多脂溶性成分，在薄層上容易過載形成拖尾，影響鑒別，經(jīng)實(shí)驗(yàn)，蒸干提取溶劑后的殘?jiān)捎靡颐颜駬u提取可很好的去除大部分雜質(zhì)，黃芩苷基本無損失，乙醚不溶部分采用甲醇溶解，可獲得較好的重復(fù)性。甘草中甘草酸的穩(wěn)定性較差，研究采用將甘草酸水解成甘草次酸進(jìn)行鑒別，可獲得較好的重復(fù)性。
本品中黃芩僅占全方藥材不足10%，因此理論溶媒用量較《中國藥典》為大；采用甲醇或乙醇提取可顯著降低雜質(zhì)提取量，有利于保護(hù)色譜柱，故本次實(shí)驗(yàn)分別對(duì)70％乙醇、無水乙醇、甲醇等提取溶媒的超聲提取30min，1，2h和回流提取2，3，4h進(jìn)行了考察，結(jié)果顯示采用70％乙醇超聲30min提取效果最好，操作簡單、快速。
【參考文獻(xiàn)】
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