生物實驗報告

　　一、實驗報告的特點

　　1．實錄性實驗報告是實驗研究工作的如實記錄。內(nèi)容包括整個實驗的主要過程，如實驗步驟、方法、實驗結(jié)果等。

　　2．科學(xué)性科技實驗報告既可以描述創(chuàng)新的內(nèi)容，又可以記述重復(fù)實驗的工作。另外，實驗報告可以不要求具有明確的結(jié)論，只要對科學(xué)研究有參考或借鑒價值，無論結(jié)果是否達到預(yù)期要求，都可以寫成科學(xué)實驗報告。

　　3．目的性以如實記載實驗過程與結(jié)果為目的的所有科學(xué)實驗工作都可以寫成科技實驗報告

　　4．規(guī)范性一般的實驗報告如分析報告、教學(xué)中的實（試）驗報告、病理化驗單等，內(nèi)容比較單一，而且項目固定，并按一定的格式印成表，由實驗者根據(jù)要求逐項填寫；比較復(fù)雜的實驗，要按一定的格式寫成實驗報告，其寫作方法具有特定的規(guī)范性。

　　二、實驗報告的種類

　　1．教學(xué)實驗報告這類實驗報告主要指理工科學(xué)生撰寫的實驗報告。重復(fù)科學(xué)技術(shù)史上前人已做過的實驗，目的是為了驗證某一學(xué)科定律或結(jié)論，訓(xùn)練學(xué)生的動手能力和表達能力。其實驗步驟和方法一般是由教師自己擬定的，只不過是教學(xué)中的一個環(huán)節(jié)。這種實驗報告通常印制成表格，由實驗者逐項填寫。它是重復(fù)前人已做過的實驗，不具有學(xué)術(shù)價值。

　　三、實驗報告的格式寫法

　　實驗報告的寫作格式主要包括以下幾個部分：

　　1．標題即實驗或試驗項目的名稱。有時在項目之前加“關(guān)于”兩字。如“關(guān)于xxx的實驗報告”。實驗報告標題要力求明確、醒目，集中映實驗的內(nèi)容。

　　2．摘要摘要是對報告內(nèi)容不加注釋和評論的簡短陳述，內(nèi)容具有立性、自含性，即不閱讀報告的全文，就能獲得必要的信息。也供文摘等二次文獻采用。寫摘要要注意：一般應(yīng)說明實驗的目的、方法、結(jié)果和最終結(jié)論等；一般不用圖、表、化學(xué)結(jié)構(gòu)式等；字數(shù)一般不超過200字；位于正文之前。

　　3正文

　　(1）引言。引言部分應(yīng)是一系列間題的說明，如：研究的對象、實驗的意義和作用；此前該項工作的發(fā)展概況以及存在的問題；本實驗要達到的目標，等等。引言要使用概括性的語言敘述，較重要的地方才略作說明，而且點到為止。

　　(2）主體。

　　①實驗原理。實驗原理是進行科學(xué)實驗的理論依據(jù)，因此，在寫作時要做到細致準確。其內(nèi)容主要包括：簡要介紹實驗涉及的主要概念、主要定律、公式等。原理部分的文字應(yīng)做到簡明、清晰，易懂。對于比較復(fù)雜和比較新穎的實驗，或者考慮到讀者并非都是專家的情況下，可以對實驗所依據(jù)的理論作簡要的說明。否則，原理部分可以省略

　�、趯嶒炘O(shè)備和方法步驟。實驗設(shè)備是實驗報告中比較重要的部分。有關(guān)實驗設(shè)備應(yīng)說明其原理、結(jié)構(gòu)、型號、性能，若有自主設(shè)計制造的設(shè)備，還要附必要的`圖紙和表格，另外還要敘述實驗的條件和對實驗的具體要求。

　　實驗方法是實驗?zāi)芊癯晒Φ谋匾獥l件之一。在寫作時要敘述得全面完整、準確無誤。在說明實驗裝置時，一般按空間順序來表述，說明操作程序時，般按時間順序來表述。

　　化學(xué)實驗中的試劑，應(yīng)標明形態(tài)、濃度、成分等。③結(jié)果與討論。這部分是實驗報告的主體，也是讀者最為關(guān)注的實質(zhì)性內(nèi)容，應(yīng)力爭寫好。實驗結(jié)果一般都用專業(yè)術(shù)語表述，引用的數(shù)字要真實，報告中的圖表、數(shù)字要符合規(guī)范要求。如果實驗結(jié)果的記錄失真，將使實驗報告喪失科學(xué)價值。

　　討論就是從理論上對實驗所得結(jié)果進行分析、解釋，闡明結(jié)果的必然性。通常是分條進行討論，要求簡短，這也是實驗報告與實驗型論文的區(qū)別所在。報告討論的內(nèi)容可包括：對實驗結(jié)果進行具體分析、說明影響實驗的根本因素、實驗結(jié)果的適用范圍及與理論結(jié)果的差別等。

　　(3）結(jié)論即對實驗結(jié)果進行總結(jié)評價，同時逐條列出實驗結(jié)果。應(yīng)當(dāng)用簡練、肯定的語言表達，必要時可引用關(guān)鍵性數(shù)據(jù)，但不再列圖表，不再提出新的事實、證據(jù)或材料。

　　4．致謝致謝是對實驗中給予助的單位或個人表示感謝。

　　實驗報告的構(gòu)成并非千篇一律，由于實驗有定性實驗、定量實驗、結(jié)構(gòu)分析實驗、析因?qū)嶒�、對照實驗、模擬實驗等類型，因此，寫作時重點應(yīng)有所不同。以上六項構(gòu)成項目，只是實驗報告的基本構(gòu)成內(nèi)容。

　　四、實驗報告的寫作要求

　　I．做好實驗是前提要寫好實驗報告，實驗前一定要熟悉實驗原理、儀器設(shè)備、操作方法。在實驗中，要按步驟操作，細心觀察現(xiàn)象，正確測取數(shù)據(jù)，認真做好記錄。

　　2．做好實驗后的綜合與分析對實驗過程中的各種現(xiàn)象以及最后的結(jié)果都要逐一分析，通過分析，揭示出其本質(zhì)的東西，這也是寫好實驗報告的關(guān)鍵。并在此分析的基礎(chǔ)上進一步綜合加工，才真正＿卜升到理性認識，使理論與實驗統(tǒng)一起來。這一過程就是實驗報告由起草到定稿的過程。

　　3．堅持客觀嚴肅的寫作態(tài)度不經(jīng)重復(fù)實驗不得修改數(shù)據(jù)；在處理數(shù)據(jù)時，遇到誤差分析和有效數(shù)字位數(shù)的問題，應(yīng)按有關(guān)要求執(zhí)行。

　　4．運用準確嚴密的表達方式

　　(1）充分利用圖表。圖表比文字敘述要直觀、簡潔、明了。

　　(2）說明的準確性、條理性。實驗報告的主要表達方式是說明，要求說明準確，言之有序。即在說明物質(zhì)的性狀時要定性、定量；在說明實驗設(shè)備、步驟和方法時要條理分明。

生物實驗報告3

　　質(zhì)粒DNA的提取、純化及檢測

　　姓名：XXX學(xué)號：2011001400XX年級：20xx級生物基地班 實驗日期：20xx年9月16日—30日組別：6組 同組者：XX

　　一、【實驗?zāi)康摹?/strong>

　　1、掌握堿變性提取法提取大腸桿菌中質(zhì)粒DNA的原理和方法。

　　2、學(xué)習(xí)并掌握凝膠電泳進行DNA的分離純化的實驗原理。

　　3、學(xué)習(xí)并掌握凝膠的制備及電泳方法。

　　4、學(xué)習(xí)并掌握凝膠中DNA的分離純化方法。

　　二、【實驗原理】

　　1、質(zhì)粒DNA的制備方法

　　質(zhì)粒（Plasmid）是獨立存在于染色體外、能自主復(fù)制并能穩(wěn)定遺傳的一種環(huán)狀雙鏈DNA分子，分布于細菌、放線菌、真菌以及一些動植物細胞中，但在細菌細胞中含量最多。細菌質(zhì)粒大小介于1～200Kb之間，是應(yīng)用最多的質(zhì)粒類群，在細菌細胞內(nèi)它們利用宿主細胞的復(fù)制機構(gòu)合成質(zhì)粒自身的DNA。

　　質(zhì)粒DNA的制備包括3個步驟：①培養(yǎng)細菌，使質(zhì)粒DNA大量擴增；②收集和裂解細菌；③分離和純化質(zhì)粒DNA。主要方法包括：堿裂解法：0。2molNaOH+1%SDS；煮沸裂解法：沸水煮沸40秒；SDS裂解法：10%SDS，一般用于質(zhì)粒大量提取。在實際操作中可以根據(jù)宿主菌株類型、質(zhì)粒分子大小、堿基組成和結(jié)構(gòu)等特點以及質(zhì)粒DNA的用途進行選擇。本實驗選擇堿裂解法提取質(zhì)粒DNA。

　　2、質(zhì)粒DNA的提取——堿變性提取法

　　在細菌細胞中，染色體DNA和質(zhì)粒DNA均被釋放出來，但是兩者變性與復(fù)性所依賴的溶pH值不同。在pH值高達12。0的堿性溶液中，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性；共價閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵斷裂，但兩條互補鏈不完全分離。因為它們在拓撲學(xué)上是相互纏繞的。當(dāng)用pH值4。6的KAc（NaAc）高鹽溶液調(diào)節(jié)堿性溶液至中性時，變性的質(zhì)粒DNA可恢復(fù)原來的共價閉合環(huán)狀超螺旋結(jié)構(gòu)而溶解于溶液中；但染色體DNA不能復(fù)性，而是與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)—SDS復(fù)合物等一起形成纏連的、可見的白色絮狀沉淀。這種沉淀通過離心，與復(fù)性的溶于溶液的質(zhì)粒DNA分離。溶于上清液的質(zhì)粒DNA，可用無水乙醇和鹽溶液，使之凝聚而形成沉淀。由于DNA和RNA性質(zhì)類似，乙醇沉淀

　　DNA的同時，也伴隨著RNA沉淀，可利用RNaseA將RNA降解。質(zhì)粒DNA溶液中的RNaseA以及一些可溶性蛋白，可通過酚/氯仿抽提除去，最后獲得純度較高的質(zhì)粒DNA。

　　3、凝膠電泳進行DNA分離純化

　　電泳（electrophoresis）是帶電物質(zhì)在電場中向著與其電荷相反的電極方向移動的現(xiàn)象。各種生物大分子在一定pH條件下，可以解離成帶電荷的離子，在電場中會向相反的電極移動。凝膠是支持電泳介質(zhì)，它具有分子篩效應(yīng)。含有電解液的凝膠在電場中，其中的電離子會發(fā)生移動，移動的速度可因電離子的大小形態(tài)及電荷量的不同而有差異。利用移動速度差異，就可以區(qū)別各種大小不同的分子。因而，凝膠電泳可用于分離、鑒定和純化DNA的片段，是分子生物學(xué)的核心技術(shù)之一。

　　凝膠電泳技術(shù)操作簡單而迅速，分辨率高，分辨范圍廣。此外，凝膠中DNA的位置可以用低濃度熒光插入染料如溴化乙錠（ethidium bromide，EB）或SYBR Gold染色直接觀察到，甚至含量少至20pg的雙鏈DNA在紫外激發(fā)下也能直接檢測到。需要的話，這些分離的DNA條帶可以從凝膠中回收，用于各種各樣目的的實驗。

　　分子生物學(xué)中，常用的兩種凝膠為瓊脂糖（agarose）和聚丙烯酰胺凝膠。這兩種凝膠能灌制成各種形狀、大小和孔徑，也能以許多不同的構(gòu)型和方位進行電泳。聚丙烯酰胺凝膠分辨率高，使用于較小分子核酸（5—500bp）的分離和蛋白質(zhì)電泳。它的分辨率非常高，長度上相差1bp或質(zhì)量上相差0。1%的DNA都可以彼此分離，這也是采用聚丙烯酰胺凝膠電泳進行DNA序列分析的分子基礎(chǔ)。雖然它能很快地進行電泳，并能容納較大的DNA上樣量，但是與瓊脂糖凝膠相比，在制備和操作上繁瑣。瓊脂糖是從海藻中提取的長鏈狀多聚物，由β—D—吡喃半乳糖與3，6—脫水—L—吡喃半乳糖組成，相對分子質(zhì)量為104—105。瓊脂糖加熱至90℃左右，即可溶化形成清亮、透明的液體，澆在模版上冷卻后形成凝膠，其凝固點為40—45℃。瓊脂糖凝膠相對于聚丙烯酰胺凝膠分辨率低，但它的分離范圍更大（50至百萬bp），小片段DNA（50—20000bp）最適合在恒定輕度和方向的電場中水平方向的瓊脂糖凝膠內(nèi)電泳分離。瓊脂糖凝膠電泳易于操作，適用于核酸電泳，測定DNA的相對分子質(zhì)量，分離經(jīng)限制酶水解的DNA的片段，進一步純化DNA等。

　　瓊脂糖凝膠電泳是一種常用的方法。在溶液中，由于核酸有磷酸基而帶有負電荷，在電場中向正極移動。DNA在瓊脂糖凝膠中的電泳遷移率主要取決于6個因素：樣品DNA分子的大小、DNA分子的構(gòu)象、瓊脂糖濃度、電泳所用電場、緩沖液和溫度。

　　三、【實驗材料】

　　1、實驗儀器

　　培養(yǎng)皿、接種環(huán)、三角瓶、酒精燈、恒溫振蕩培養(yǎng)箱、50ml離心管、1。5ml塑料離心管（Eppendorf管）、高速離心機、漩渦振蕩器、微量移液器、不同型號槍頭、天平、制膠槽、梳子、電泳儀、吸管、量筒、微波爐、滅菌鍋、恒溫水浴鍋、試劑瓶、衛(wèi)生紙和記號筆、手套等。

　　2、實驗試劑

　　LB培養(yǎng)基，抗生素Ap（氨芐青霉素），溶液Ⅰ，溶液Ⅱ，溶液Ⅲ，RNaseA母液，TE緩沖液，飽和酚，氯仿/異戊醇混合液，酚/氯仿/異戊醇（PCI）混合液，預(yù)冷無水乙醇，TAE電泳緩沖液（10×），上樣緩沖液（6×），瓊脂糖，溴化乙錠（EB），DNA相對分子質(zhì)量標準物DNA Marker λ/Hind Ⅲ，5mol/L pH 5。2的醋酸鈉。

　　四、【實驗步驟】

　　1、準備實驗

　　配制LB液體培養(yǎng)基，分裝到100ml的三角瓶中20ml，300ml的三角瓶中50ml，另配LB固體培養(yǎng)基；準備1000ul、200ul、10ul移液槍尖各一盒，1。5ml離心管若干于500ml三角瓶中，50ml離心管2個 ，將上述物品包好連同配好的培養(yǎng)基一同滅菌。

　　2、菌體培養(yǎng)

　　在含有Ap的LB平板上挑取一環(huán)攜帶有質(zhì)粒pUC19的E。coli DH5單菌落，接種于20mlLB液體培養(yǎng)基中進行37℃振蕩過夜培養(yǎng)，培養(yǎng)基中加Ap100ul

　�。�100ug/ml），質(zhì)粒pUC19具有Ap抗性基因，使得帶有pUC19的質(zhì)粒得以生長。 過夜培養(yǎng)后菌體量大，雜質(zhì)較多，然后用移液槍吸取過夜培養(yǎng)物2ml轉(zhuǎn)接于50mlLB液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基中加入Ap250ul，37℃振蕩培養(yǎng)4—6h至對數(shù)生長期后期，生長速率快，代謝旺盛，酶系活躍，雜質(zhì)少，適合提取質(zhì)粒。

　　3、質(zhì)粒提取

　�。�1）稱量空的50ml離心管的重量為14。331g，然后將三角瓶中的菌液倒至管中，不能倒?jié)M，液面距管口約1cm，7000rpm離心5分鐘后棄去上清液，收集菌體細胞。

　�。�2）向離心管中懸滴加入5ml冰預(yù)冷的溶液Ⅰ打散菌體洗滌，用漩渦振蕩器使之充分懸浮后用槍尖吹吸混勻，同步驟（1）離心，棄去上清，將離心管倒置于吸水紙上，使上清液全部流盡干燥，然后稱重得14。437g，則菌體質(zhì)量為106mg。

　　（3）洗滌后每100mg菌體應(yīng)加入冰預(yù)冷的溶液Ⅰ1ml，106mg菌體按100mg菌體處理，加入溶液Ⅰ1ml，打散菌泥、吹吸混勻，冰浴5min。溶液Ⅰ中的葡萄糖使

　　溶液密度增加，懸浮后的大腸桿菌不會快速沉積到管子的底部；維持滲透壓，防止細胞提前破裂，防止DNA受機械剪切力作用而降解。EDTA是Ca2+和Mg2+等二價金屬離子的螯合劑，可抑制DNase的活性，抑制微生物的生長。Tris—Cl溶液提供適當(dāng)?shù)膒H。

　�。�4） 按比例加入新配制的'溶液Ⅱ2ml（與溶液Ⅰ對應(yīng)），輕加輕搖，冰浴5min。溶液變清亮透明粘稠如蛋清狀。溶液Ⅱ中的NaOH使細胞膜發(fā)生了從bilayer（雙層膜）結(jié)構(gòu)向micelle（微囊）結(jié)構(gòu)的相變化導(dǎo)致細胞溶解。同時，強堿性使染色體DNA、質(zhì)粒DNA和蛋白質(zhì)變性；SDS為下一步沉淀做鋪墊。

　　（5）按比例加入冰預(yù)冷的溶液Ⅲ1。5ml（與溶液Ⅰ、Ⅱ?qū)��?yīng)），輕加輕搖，冰浴10min。溶液出現(xiàn)白色絮狀沉淀。沉淀為蛋白質(zhì)SDS復(fù)合物、細胞碎片和其他大分子成分。溶液Ⅲ中的HAc中和NaOH，因為長時間的堿性條件會打斷基因組DNA，只要是50－100 kb大小的片斷，就不能再被PDS共沉淀。同時變性的質(zhì)粒DNA復(fù)性。反應(yīng)形成的高鹽環(huán)境進一步加速了沉淀。

　�。�6）12000rpm離心15min，白色沉淀聚集在離心管一側(cè)，用移液槍將上清液轉(zhuǎn)移到另一潔凈的離心管中。然后向上清液中加入1/10體積的3MNaAc混勻，加入2倍體積的冰無水乙醇，混勻，—20℃下沉降30分鐘。乙醇可以任意比和水相混溶，乙醇與核酸不會起任何化學(xué)反應(yīng)，對DNA很安全，因此是理想的沉淀劑。 DNA溶液是DNA以水合狀態(tài)穩(wěn)定存在，當(dāng)加入乙醇時，乙醇會奪去DNA周圍的水分子，使DNA失水而易于聚合。在pH為8左右的溶液中，DNA分子是帶負電荷的，加一定濃度的NaAc或NaCl，易于互相聚合而形成DNA鈉鹽沉淀。

　�。�7） 以12000rpm離心15min，小心倒去上清液，得到DNA沉淀。加入3ml70%冰乙醇，輕輕地覆蓋沉淀，不打散沉淀，洗滌一次。

　　（8）以12000rpm離心5min，離心管底部DNA沉淀所在面應(yīng)與收集沉淀面一致。去掉上清液，將離心管上沉淀部位做好標記，將離心管倒置于吸水紙上，干燥5min。粗提取的質(zhì)粒呈淺黃色，隨著水分的減少質(zhì)粒變?yōu)闊o色。所以為了完全溶解質(zhì)粒，要在離心管上標記質(zhì)粒所在位置。

　�。�9）將DNA沉淀溶于1mlTE緩沖液中，移液槍吹吸助溶，然后將溶解液轉(zhuǎn)移到一個Eppendorf管中。TE是pH緩沖液，為DNA提供穩(wěn)定的生理狀態(tài)，呈弱堿性，有利于保護堿基對。同時含有EDTA是二價陽離子的螯合劑，抑制DNA酶作用。

　　4、質(zhì)粒純化

　�。�1）Eppendorf管中加入RNase A（純濃度＞50ug/ml），37℃保溫0。5—1h

　�。�2）將上述的溶液平均分配到2個1。5ml的微量離心管中，每管0。5ml，分別加入與溶液等體積的（500ul）Tris飽和苯酚溶液，振蕩混勻，7000rpm，離心5min，上清液轉(zhuǎn)移到一潔凈的Eppendorf管中。苯酚是經(jīng)Tris飽和后的，顯黃色。苯

　　酚加入后，溶液分層，苯酚向下，下層呈淺黃色，上層溶液無色，在中間產(chǎn)生大量白色沉淀，此為變性后的蛋白質(zhì)。

　�。�3）加入等體積的（500ul）苯酚/氯仿溶液（1：1），振蕩混勻， 7000rpm，離心5min，上清液轉(zhuǎn)移到到另一潔凈的Eppendorf管中。苯酚是強的蛋白變性劑，但是苯酚留在質(zhì)粒溶液中會影響DNA的酶切，它本身易被氧化，會損傷質(zhì)粒。氯仿也是蛋白變性劑，但是比酚弱，且能溶解質(zhì)粒中的脂類，溶解苯酚，去除溶液中的苯酚。異戊醇則可起消除抽提過程中出現(xiàn)的泡沫，有利于分層更明顯。此時溶液中已看不到明顯的白色沉淀，但仍有蛋白質(zhì)的存在。

　　（4）加入等體積的氯仿溶液，振蕩混勻， 7000rpm，離心5min，上清液轉(zhuǎn)移到一潔凈的Eppendorf管中，得上清液400ul。

　　（5）向上清液中加入1/10體積的NaAc混勻，再加入2倍體積的冰無水乙醇，混勻，—20℃下沉降30分鐘。

　�。�6）以12000rpm，離心15min，棄去上清液，得到DNA沉淀，為白色。

　�。�7）向DNA沉淀中加入70%冰乙醇200ul，不打散沉淀，洗滌。然后以12000rpm離心5min，離心管底部DNA沉淀所在面應(yīng)與收集沉淀面一致。

　　（8）去掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，室溫干燥。用50ulTE溶解于1管中。

　　5、質(zhì)粒檢測

　�。�1）稱取0。4g的瓊脂糖，置于一錐形瓶中，在三角瓶上標好液面位置，加入40ml的1×TAE電泳緩沖液，再加入5—10ml重蒸水，以補充在溶膠過程中損失的水分。然后置微波爐加熱至完全溶化，溶液透明。冷卻至50℃左右，倒入制板槽制板。

　�。�2）待膠凝固后，小心拔起梳子，使加樣孔端置陰極段放進電泳槽內(nèi)。在槽內(nèi)加入1×TAE 電泳緩沖液，至液面覆蓋過膠面2—3cm。取1μl加電泳載樣液和3μl質(zhì)粒樣品于小紙片上，用移液槍混勻。

　�。�3）電泳1h，觀察溴酚蘭的帶（藍色）的移動。

　�。�4） 把膠槽取出，小心滑出膠塊，放進EB溶液中進行染色，完全浸泡約5min。

　�。�5）凝膠成像儀觀察。

　　五、【注意事項】

　　（1）滴加溶液II時，要逐滴加入，且要輕加輕搖溶液使之混勻，整體動作要快，因為強堿在溶液中停留時間不能過長，否則會破壞質(zhì)粒DNA。

　�。�2）加入溶液III后，生成了大量的絮狀沉淀，溶液III中和強堿使質(zhì)粒復(fù)性，不可劇烈震蕩， 防止染色體DNA斷裂，應(yīng)該上下顛倒離心管，使其混勻。

生物實驗報告4