下列不屬于酶制劑的是
A.蛋白酶 B.脂肪酶 C.淀粉酶 D.麥芽糖酶
解析:目前常用的酶制劑有四大類:蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纖維素酶。其中,應(yīng)用最廣泛、效果最明顯的是堿性蛋白酶和堿性脂肪酶。堿性蛋白酶能將血漬、奶漬等含有的大分子蛋白質(zhì)水解成可溶性的氨基酸或小分子的肽,使污跡從衣物上脫落。脂肪酶、淀粉酶和纖維素酶也能分別將大分子的脂肪、淀粉和纖維素水解為小分子物質(zhì),使洗衣粉具有更強的去污能力。
《酵母細胞的固定化》
一、基礎(chǔ)知識
酶:優(yōu)點:催化效率高,低耗能、低污染,大規(guī)模地應(yīng)用于食品、化工等各個領(lǐng)域。
實際問題:對環(huán)境條件敏感,易失活;溶液中的酶很難回收,不能再次利用,提高了生產(chǎn)成本;反應(yīng)后的酶會混合在產(chǎn)物中,如不除去,會影響產(chǎn)品質(zhì)量。
設(shè)想:
固定化酶:優(yōu)點
實際問題:一種酶只能催化一種化學反應(yīng),而在生產(chǎn)實踐中,很多產(chǎn)物的形成 都是通過一系列的酶促反應(yīng)才能得到的
設(shè)想:
固定化細胞:優(yōu)點
二、固定化酶的應(yīng)用實例
高果糖漿是指
能將葡萄糖轉(zhuǎn)化為果糖的酶是 。使用固定化酶技術(shù),將這種酶固定在一種 上,
再將這些酶顆粒裝到一個反應(yīng)柱內(nèi),柱子底端裝上分布著許多小孔的 。酶顆粒無法通過篩板的小孔,而反應(yīng)溶液卻可以自由出入。生產(chǎn)過程中,將葡萄糖溶液從反應(yīng)柱的上端注入,使葡萄糖溶液流過反應(yīng)柱,與 接觸,轉(zhuǎn)化成果糖,從反應(yīng)柱的下端流出。反應(yīng)柱能連續(xù)使用半年,大大降低了生產(chǎn)成本,提高了果糖的產(chǎn)量和質(zhì)量。
三、固定化細胞技術(shù)
固定化酶和固定化細胞是利用 或
方法將酶或細胞固定在一定空間內(nèi)的技術(shù),包括 、 和 法。
一般來說,酶更適合采用 和 法固定,而細胞多采用 法固定化。這是因為細胞個大,而酶分子很小;個大的細胞難以 或 ,而個小的酶容易從 中漏出。
包埋法法固定化細胞即將微生物細胞 包埋在不溶于水的 中。常用的載體有 、 、 、 和 等。
四、實驗操作
(一)制備固定化酵母細胞
制備固定化酵母細胞需要的材料是 、 、 、 、
、 、 、 、 和
1.酵母菌的活化
活化就是處于 狀態(tài)的微生物重新恢復正常的生活狀態(tài)。
2.配制物質(zhì)的量嘗試為0.05mol/L的CaCl2溶液
3.配制海藻酸鈉溶液
加熱溶化海藻酸鈉時要注意:
4.海藻酸鈉溶液與酵母菌細胞混合
5.固定化酵母細胞
以恒定的速度緩慢地將注射器中的溶液滴加到配制好的 溶液中,并浸泡 (時間)。
(二)用固定化酵母細胞發(fā)酵
1.將固定好的酵母細胞用 沖洗2-3次。
2.發(fā)酵時的溫度就為 ,時間 。
五、結(jié)果分析與評價
(一)觀察凝膠珠的顏色和形狀
如果制作的凝膠珠顏色過淺、呈白色,說明 ;如果形成的凝膠珠不是圓形或橢圓形,則說明 ,制作失敗,需要再作嘗試。
(二)觀察發(fā)酵的葡萄糖溶液
利用固定的酵母細胞發(fā)酵產(chǎn)生酒精,可以看到產(chǎn)生了很多 ,同時會聞到
補充:直接使用酶、固定化酶和固定化細胞催化的優(yōu)缺點:
類型 優(yōu)點 不足 直接使用酶 催化效率高,低耗能、低污染等。 對環(huán)境條件非常敏感,容易失活;溶液中的酶很難回收,不能被再次利用,提高了生產(chǎn)成本;反應(yīng)后酶會混在產(chǎn)物中,可能影響產(chǎn)品質(zhì)量。 固定化酶 酶既能與反應(yīng)物接觸,又能與產(chǎn)物分離,同時,固定在載體上的酶還可以被反復利用。 一種酶只能催化一種化學反應(yīng),而在生產(chǎn)實踐中,很多產(chǎn)物的形成都通過一系列的酶促反應(yīng)才能得到的。 固定化細胞 成本低,操作更容易。 固定后的酶或細胞與反應(yīng)物不容易接近,可能導致反應(yīng)效果下降等。
【疑難點撥】
1.細胞的活化。
提示:在缺水的狀態(tài)下,微生物會處于休眠狀態(tài);罨褪亲屘幱谛菝郀顟B(tài)的微生物重新恢復正常的生活狀態(tài)。酵母細胞所需要的活化時間較短,一般需要0.5~1小時。
2.如何檢驗?zāi)z珠的質(zhì)量是否合格。
提示:檢驗?zāi)z珠的質(zhì)量是否合格,可以采用以下方法。一是用鑷子夾起一個凝膠珠放在實驗桌上用手擠壓,如果凝膠珠不破裂,沒有液體流出,就表明凝膠珠的制作成功。二是在實驗桌上用力摔打凝膠珠,如果凝膠珠很容易彈起,也表明制備的凝膠珠是成功的。
3.酶和細胞分別適應(yīng)哪種固定方法?
提示:一般來說,酶更適合采用化學結(jié)合和物理吸附法固定,而細胞多采用包埋法固定化。這是因為細胞個大,而酶分子很小;個大的難以被吸附或結(jié)合,而個小的酶容易從包埋材料中漏出。
【典例解析】
酶和細胞分別適應(yīng)哪種固定方法?
提示:一般來說,酶更適合采用化學結(jié)合和物理吸附法固定,而細胞多采用包埋法 固定化。這是因為細胞個大,而酶分子很小;個大的難以被吸附或結(jié)合,而個小的酶容易從包埋材料中漏出。
《DNA的粗提取與鑒定》
一、提取DNA的方法
提取生物大分子的基本思路是 。對于DNA的粗提取而言,就是要利用 、 等在物理和化學性質(zhì)方面的差異,提取DNA,去除其他成分。
1)DNA的溶解性 DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的 中溶解度不同,利用這一特點,選擇適當?shù)柠}濃度就能 充分溶解,而使雜質(zhì)沉淀,或者相反,以達到分離目的。
此外,DNA不溶于 溶液,但是細胞中的某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。利用這一原理,可以將DNA與蛋白質(zhì)進一步的分離。
2)DNA對酶、高溫和洗滌劑的耐受性 蛋白酶能水解 ,但是對 沒有影響。大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受60-80oC的高溫,而DNA在 以上才會變性。洗滌劑能夠瓦解 ,但對DNA沒有影響。
3)DNA的鑒定 在 條件下,DNA遇 會被染成 色,因此二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。
二、實驗設(shè)計
1)實驗材料的選取 凡是含有 的生物材料都可以考慮,但是使用 的生物組織,成功的可能性更大。在下面的生物材料中選取適合的實驗材料:
魚卵、豬肝、菜花(花椰菜)、香蕉、雞血、哺乳動物的紅細胞、獼猴桃、洋蔥、豌豆、菠菜、在液體培養(yǎng)基的大腸桿菌
2)破碎細胞,獲取含DNA的濾液 動物細胞的破碎比較容易,以雞血細胞為例,在雞血細胞液中加入一定量的 ,同時用 攪拌,過濾后收集濾液即可。如果實驗材料是植物細胞,需要先用 溶解細胞膜。例如,提取洋蔥的DNA時,在切碎的洋蔥中加入一定的 和 ,進行充分的攪拌和研磨,過濾后收集研磨液。
3)去除濾液中的雜質(zhì)
4)DNA的析出與鑒定
將處理后的溶液過濾,加入與濾液體積 、冷卻的 ,靜置 ,溶液中會出現(xiàn) ,這就是粗提取的DNA。用玻璃棒 攪拌,卷起絲狀物,并用濾紙吸取上面的水分。
取兩支20ml的試管,各加入物質(zhì)的量濃度為 的NaCl溶液5ml,將絲狀物放入其中一支試管中,用玻璃棒攪拌,使絲狀物溶解。然后,向兩支試管中各加入4ml的
。混合均勻后,將試管置于 中加熱5min,待試管冷卻后,比較兩支試管溶液顏色的變化,看看溶解有DNA的溶液是否變 。
三、操作提示
以血液為實驗材料時,每100ml血液中需要加入3g ,防止 。
加入洗滌劑后,動作要 、 ,否則容易產(chǎn)生大量的泡沫,不利于后續(xù)步驟地操作。加入酒精和用玻璃棒攪拌時,動作要 ,以免 ,導致DNA分子不能形成絮狀沉淀。
二苯胺試劑要 ,否則會影響鑒定的效果。
四、結(jié)果分析與評價
【疑難點撥】
1.為什么加入蒸餾水能使雞血細胞破裂?
答:蒸餾水對于雞血細胞來說是一種低滲液體,水分可以大量進入血細胞內(nèi),使血細胞脹裂,再加上攪拌的機械作用,就加速了雞血細胞的破裂(細胞膜和核膜的破裂),從而釋放出DNA。
2.加入洗滌劑和食鹽的作用分別是什么?
答:洗滌劑是一些離子去污劑,能溶解細胞膜,有利于DNA的釋放;食鹽的主要成分是NaCl,有利于DNA的溶解。
3.如果研磨不充分,會對實驗結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響?
答:研磨不充分會使細胞核內(nèi)的DNA釋放不完全,提取的DNA量變少,影響實驗結(jié)果,導致看不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定不顯示藍色等。
4.此步驟獲得的濾液中可能含有哪些細胞成分?
答:可能含有核蛋白、多糖和RNA等雜質(zhì)。
5.為什么反復地溶解與析出DNA,能夠去除雜質(zhì)?
答:用高鹽濃度的溶液溶解DNA,能除去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì);用低鹽濃度使DNA析出,能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。因此,通過反復溶解與析出DNA,就能夠除去與DNA溶解度不同的多種雜質(zhì)。
6.方案二與方案三的原理有什么不同?
答:方案二是利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白,從而使提取的DNA與蛋白質(zhì)分開;方案三利用的是DNA和蛋白質(zhì)對高溫耐受性的不同,從而使蛋白質(zhì)變性,與DNA分離。
7. DNA的溶解度與NaCl溶液濃度的關(guān)系:
當NaCl溶液濃度低于0.14mol/L時,隨濃度的升高,DNA的溶解度降低;當NaCl溶液濃度高于0.14mol/L時,隨濃度升高,DNA的溶解度升高。
8. 制備雞血細胞液時,要在新鮮的雞血中加入檸檬酸鈉的原因
制備雞血細胞液時,要在新鮮的雞血中加入抗凝劑--檸檬酸鈉,防止血液凝固。其原理是檸檬酸鈉能與血漿中Ca2+發(fā)生反應(yīng),生成檸檬酸鈣絡(luò)合物,血漿中游離的Ca2+大大減少,血液便不會凝固,因為雞血紅細胞,白細胞都有細胞核,DNA主要存在于細胞核中,所以在離心或靜置沉淀后,要棄出上層清液--血漿。
9.提取DNA的第一步是材料的選取,其目的是一定要選取DNA含量較高的生物材料,否則會由于實驗過程中或多或少的損失而造成檢測的困難;第二步是DNA的釋放和溶解,這一步是實驗成功與否的關(guān)鍵,要盡可能使細胞內(nèi)的DNA全部溶解;第三步是DNA的純化,即根據(jù)DNA的溶解特性、對酶及高溫的耐受性的不同等特性,最大限度地將DNA與雜質(zhì)分開;最后一步是對DNA進行鑒定,這是對整個實驗的結(jié)果的檢測。
10.在DNA的析出的步驟中用到玻璃棒攪拌時,注意動作要輕緩,以免加劇DNA分子的斷裂,導致DNA分子不能形成絮狀沉淀。
11.盛放雞血細胞液的容器,最好是塑料容器。雞血細胞破碎以后釋放出的DNA,容易被玻璃容器吸附,由于細胞內(nèi)DNA的含量本來就比較少,再被玻璃容器吸附去一部分,提取到的DNA就會更少。因此,實驗過程中最好使用塑料的燒杯和試管,這樣可以減少提取過程的DNA的損失。