論改良嗜酸性粒細胞計數(shù)稀釋液及應用
嗜酸性粒細胞計數(shù)臨床常見的是直接計數(shù)、涂片白細胞分類計數(shù)和血球計數(shù)儀分類計數(shù)3種方法。但是臨床上為了解疾病進展過程，需要動態(tài)觀察嗜酸性粒細胞的變化，往往采用嗜酸性粒細胞直接計數(shù)。文獻報道”。嗜酸性粒細胞直接計數(shù)的`稀釋液較多，用等滲的生理鹽水配制嗜酸性粒細胞計數(shù)稀釋液，與《全國臨床檢驗操作規(guī)程》推薦的稀釋液相比，各有優(yōu)缺點。 我院探討使用血小板計數(shù)稀釋液來配制嗜酸性粒細胞計數(shù)稀釋液，在臨床實踐了3年，計數(shù)結(jié)果準確可靠，報告如下。
1、材料與方法
1．1 試劑《全國臨床檢驗操作規(guī)程》推薦的稀釋液配制詳見《全國臨床檢驗操作規(guī)程》。嗜酸性粒細胞計數(shù)稀釋液。稱取草酸銨1．Og，EDTA．2Na 0．012g，伊紅0．2g，溶于50mL蒸餾水中，再加人0．6mL TritonX一100，加蒸餾水至lOOmL。
1．2 方法于試管中加入稀釋液0．38mL，取患者末梢血(或EDTA．2K抗凝全血)0．02 mL，混勻，5min后沖入計數(shù)板的兩計數(shù)池內(nèi)，靜置3～5min。用低倍鏡計數(shù)，鏡下嗜酸性粒細胞被染成桔紅色，其它未被破壞的細胞幾乎不著色。計數(shù)兩個計數(shù)室10個大方格(中央和四角大方格)內(nèi)嗜酸性粒細胞數(shù)。計算嗜酸性粒細胞／L=10個大方格內(nèi)嗜酸性粒細胞數(shù)X20×10 ／L。
2、結(jié)果
2．1 對比試驗取住院121例患者的EDTA．2K抗凝全血，分別用《全國臨床檢驗操作規(guī)程》推薦的稀釋液(Y)與本法稀釋液(X)進行嗜酸性粒細胞計數(shù)，結(jié)果本法稀釋液(163．4±34．7)×106／L，推薦稀釋液(165．0±35．1)×10／L，2種稀釋液計數(shù)結(jié)果差異無顯著性(P>0．05)，其相關(guān)系數(shù)r=0．991，相關(guān)方程Y=1．0216X +3．1247。
2．2 著色時問比較 將稀釋液與抗凝全血混合后，分別在120、180、240、270、300s進行直接計數(shù)，《全國臨床檢驗操作規(guī)程》推薦的稀釋液在300s后嗜酸性粒細胞被染成紅色，本法稀釋液在180s后嗜酸性粒細胞被染成紅色。
2．3 重復性試驗用本法稀釋液進行嗜酸性粒細胞計數(shù)25次重復試驗，x±S=(226．1±6．9)X 10 ／L，CV=3．1％。
3、討論
文獻報道，嗜酸性粒細胞計數(shù)稀釋液有很多種，主要是圍繞破壞紅細胞和部分白細胞，嗜酸性粒細胞不被破壞且著色進行改進的。根據(jù)草酸銨有破壞紅細胞的作用，巧妙地運用血小板計數(shù)稀釋液來配制嗜酸性粒細胞計數(shù)稀釋液。我們在配制血小板計數(shù)稀釋液的同時，在每100 mL血小板計數(shù)稀釋液中加入伊紅0．2g、0．6mL TritonX一100即可成為嗜酸性粒細胞計數(shù)稀釋液，這樣就可以簡化嗜酸性粒細胞計數(shù)稀釋液配制過程。ED—TA．2Na有抗凝和防止草酸鈣沉淀作用。表面活性劑TritonX一100能加速染料溶解，增強染料對細胞的滲透作用，從而使嗜酸性粒細胞著色加快。TritonX一100的濃度為0．6％時，只破壞除嗜酸性粒細胞以外的細胞，嗜酸性粒細胞幾乎不受影響。本稀釋液沒使用揮發(fā)性試劑，這樣稀釋液保質(zhì)期就相對較長，使用一年之久，仍效果很好。本法具有試劑配制簡單，著色時間短，試劑保質(zhì)期長，一種試劑2種用途等優(yōu)點。
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